Définitions et techniques de précipitation

Courbe de Heidelberg

Les techniques de précipitation permettent de déterminer la concentration d'antigènes ou d'anticorps. Elles peuvent être effectuées en phase solide (immunodiffusion radiale ou immunoélectrophorèse) ou en phase liquide (turbidimétrie ou néphélométrie).

courbe de Heidelberg décrit le fait suivant : en cas d'excès d'anticorps (faible rapport antigène/anticorps), des complexes immuns solubles se forment, dont la quantité est proportionnelle à la concentration de l'antigène. Avec une concentration croissante de l'antigène, la région d'équivalence est atteinte. On observe alors la formation de complexes immuns insolubles qui précipitent et peuvent être visualisés. Si l'antigène est en excès, il y a formation de complexes immuns solubles dont la concentration correspond à celle de l'antigène. Cela peut donner l'impression, fausse, d'une faible concentration d'antigènes. Il est donc nécessaire de diluer les échantillons à analyser afin de maintenir la concentration de l'antigène dans la région ascendante de la courbe de Heidelberg et d'obtenir un résultat proportionnel à sa concentration.

Précipitation et agglutination

Précipitation : formation de complexes immuns avec des antigènes moléculaires. En maintenant constante la concentration de l'anticorps, l'antigène est dilué par diffusion, jusqu'à la formation d'un précipité lorsque la région d'équivalence est atteinte.

: formation de complexes immuns avec des antigènes particulaires. On distingue les tests d'agglutination directe (par exemple test d'hémagglutination pour déterminer les groupes sanguins et agglutination de bactéries de Widal) et les tests d'agglutination indirecte (par exemple latex-agglutination et hémagglutination passive de Boyden).

Techniques de précipitation en phase liquide

Turbidimétrie : l'échantillon contenant l'antigène est mis en contact avec un excès d'anticorps spécifique et déposé dans une cuve d'analyse. La formation de complexes immuns solubles change l'absorbance de la solution qui peut être mesurée par photométrie. Lors de l'détermination du point final, l'accroissement de l'absorption dans une période donnée correspond à la concentration de l'antigène.

Néphélométrie : cette technique mesure éga lement la formation de complexes immuns entre l'antigène dans l'échantillon et un antisérum spécifique. Les complexes immuns dispersent les rayons laser passant par la cuve. Les rayons dispersés sont focalisés par un système optique vers un photodétecteur, et la concentration de l'antigène est déterminée selon une courbe de calibrage.

Immunodiffusion radiale simple (IRS) de Mancini

On recouvre des plaques avec un gel qui contient un anticorps spécifique de l'antigène recherché, en distribution homogène. L'échantillon d'analyse est déposé dans des puits découpés. L'antigène continu diffuse de façon radiale dans le gel, en étant continuellement dilué. Lorsque la région d'équivalence est atteinte, les complexes immuns formés précipitent. Dans la méthode de Mancini, la concentration de l'antigène est proportionnelle au carré du diamètre de l'anneau de précipitation. Elle est déterminée par référence à la courbe de calibrage obtenue avec des standards.